کلونینگ و بیان ژن نانوبادی علیه انتروتوکسین B باکتری استافیلوکوکوس اورئوس

زمینه و هدف: باکتری استافیلوکوکوس اورئوس با ترشح انتروتوکسین‌های متعدد باعث بیماری‌های مختلف می‌شود، به همین دلیل روش‌های مؤثر و آسان شناسایی انتروتوکسین­ها موردنیاز است. امروزه غالباً از روش‌های ایمونوشیمیایی برمبنای آنتی‌بادی‌های مونوکلونال استفاده می‌شود. در سرم خون خانواده شترسانان آنتی‌بادی‌های زنجیره سنگین یافت شده که VHH یا نانوبادی نامیده می‌شوند. خصوصیات منحصربه‌فرد این آنتی‌بادی‌ها از قبیل اتصال به مولکول‌های کوچک نظیر توکسین‌ها، آن‌ها را کاندیدهای جذابی برای توسعه ترکیبات دارویی نموده است. برای دستیابی به مولکول VHH علیه انتروتوکسین B استافیلوکوکوس تحقیق حاضر انجام‌ شده ‌است. مواد و روش‌ها: غنی‌سازی کتابخانه‌ی فاژی به‌منظور جداسازی نانوبادی‌های اختصاصی علیه توکسین در کارهای قبل انجام‌شده بود. در ادامه وکتور pCANTAB 5E  حاوی VHH از باکتری E.coli سویه xl1blue، استخراج و پس از انجام واکنش PCR با پرایمرهای مربوطه، ساب‌کلونینگ در وکتور بیانی (+)pET21a با مکان‌های برش NdeI و XhoI صورت گرفت. ترانسفورماسیون وکتور درون باکتری E.coli سویه بیانی (DE3) BL2I انجام شد. سپس سلول‌ها تحت القای IPTG قرار گرفتند و زمان و شرایط تولید بهینه گردید، درنهایت بیان پروتئین توسط تکنیک SDS-PAGE و وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج: برای تأیید کلونینگ ژن نانوبادی درون وکتور pET21a(+)، توالی نوکلئوتیدی ژن آنالیز و ترانسفورم به باکتری E.coli سویه DE3))BL21 با موفقیت انجام شد. پس از القاء، پروتئین فعال درون سلول توسط روش SDS-PAGE مشاهده و توسط لکه‌گذاری وسترن تأیید شد. نتیجه‌گیری: در این تحقیق کلونینگ، ساب کلونینگ و بیان ژن نانوبادی انجام شد. تولید این پروتئین نوترکیب می‌تواند گامی مهم در جهت توسعه روش‌های درمانی جدید و یا تولید واکسن علیه انتروتوکسین B باکتری استافیلوکوکوس اورئوس بردارد.